CleanPlex ®  UMI 技術(shù)是一種多重 PCR 或基于擴(kuò)增子的 NGS 靶向測(cè)序技術(shù)，用于精確的腫瘤 DNA 分析。它具有高度先進(jìn)的專有引物設(shè)計(jì)算法和 創(chuàng)新的分子條形碼化學(xué)。它們共同使得 CleanPlex UMI 即用型和定制 NGS 面板能夠自信地檢測(cè)游離 DNA (cfDNA) 中的低頻變異（循環(huán)腫瘤 DNA - ctDNA）。

CleanPlex UMI 目標(biāo)富集工作流程

CleanPlex UMI 基于多重 PCR 的目標(biāo)富集工作流程。 CleanPlex UMI 技術(shù)允許輕松快速地準(zhǔn)備分子條形碼和目標(biāo)富集的 NGS 文庫用于測(cè)序。 

超快速且簡(jiǎn)單的工作流程

CleanPlex UMI 技術(shù)具有簡(jiǎn)單的工作流程，可在 3.5 小時(shí)內(nèi)完成，并且只需要 85 分鐘的動(dòng)手時(shí)間?？梢钥焖僦苽浞肿訔l形碼和目標(biāo)富集的 NGS 文庫，以便更快地獲得結(jié)果。

CleanPlex UMI 技術(shù)具有的分子標(biāo)識(shí)符

CleanPlex UMI 目標(biāo)文庫制備方案。 CleanPlex UMI 協(xié)議涉及 3 個(gè)簡(jiǎn)單步驟，每個(gè)步驟包括熱循環(huán)或孵育反應(yīng)，然后使用磁珠進(jìn)行文庫純化。簡(jiǎn)化的方案僅需 3.5 小時(shí)即可完成。完成該協(xié)議所需的儀器是熱循環(huán)儀。

CleanPlex UMI 技術(shù)使用專有的多重 PCR 分子條形碼化學(xué)來標(biāo)記每個(gè) DNA 分子。整合的分子標(biāo)識(shí)符 (UMI) 可以糾正測(cè)序數(shù)據(jù)中的 PCR 和測(cè)序錯(cuò)誤，從而提高變異檢測(cè)的靈敏度和特異性。

CleanPlex UMI（分子條形碼）化學(xué)

CleanPlex UMI 分子條形碼化學(xué)。 CleanPlex UMI 工作流程的第一步是多重 PCR 反應(yīng)，該反應(yīng)使用 UMI 標(biāo)記的目標(biāo)特異性引物對(duì)感興趣的目標(biāo)進(jìn)行條形碼和擴(kuò)增。第二步是生化反應(yīng)，通過去除攜帶冗余和部分 UMI 的 PCR 產(chǎn)物來解析正確的 UMI。最后一步是使用 CleanPlex 雙索引 PCR 引物的擴(kuò)增反應(yīng)，可確保高精度樣品解復(fù)用，以擴(kuò)增樣品級(jí)索引并將其添加到 NGS 文庫中。建議使用CleanMag ®磁珠進(jìn)行文庫純化。

CleanPlex UMI 技術(shù)結(jié)合了分子標(biāo)識(shí)符 (UMI)，能夠可靠地檢測(cè)低頻變異。 可以根據(jù)測(cè)序數(shù)據(jù)構(gòu)建共有序列，以在變體調(diào)用之前消除 PCR 和測(cè)序錯(cuò)誤。因此，可以準(zhǔn)確地將真正的突變與背景噪聲區(qū)分開來。借助 CleanPlex UMI 技術(shù)，只需 30 ng 的輸入 DNA，即可高特異性地檢測(cè)低于 0.5% 等位基因頻率的低頻變異。

UMI 支持準(zhǔn)確的變體調(diào)用。 使用 CleanPlex UMI 肺癌面板，使用 50 ng 次要等位基因頻率 (MAF) 為 0.1% 的 SeraCare Seraseq™ ctDNA Complete™ 突變混合物來制備靶向 NGS 文庫，該文庫涵蓋了參考材料中存在的 13 個(gè)突變。使用和不使用 UMI 來分析所得數(shù)據(jù)。底部面板顯示，啟用 UMI 的糾錯(cuò)可顯著減少誤報(bào)，從而將真正的突變（橙色圓圈和三角形）與背景噪聲（白色圓圈）區(qū)分開來。