dsGreen 是一種非常靈敏的染料，用于檢測(cè)雙鏈 DNA (dsDNA)。兩種染料均用于實(shí)時(shí) qPCR 實(shí)驗(yàn)中擴(kuò)增的非特異性檢測(cè)。

1. 如果 dsGreen 試劑儲(chǔ)存溫度低于 20 °С，請(qǐng)將其解凍并保存在室溫下。為了快速解凍，可將試劑加熱至 50 °С。

2. 根據(jù) PCR 試劑制造商的說(shuō)明計(jì)算反應(yīng)所需試劑的體積。請(qǐng)注意，dsGreen（庫(kù)存 100х）必須在 PCR 主混合物中稀釋至最高 1 倍濃度。

3. 根據(jù) PCR 試劑制造商的說(shuō)明制備不含 DNA 的 1x 主混合物，添加必要量的 dsGreen。如果您使用不帶熱啟動(dòng)的 Taq 聚合酶，請(qǐng)將預(yù)混液和 PCR 管放在冰上。

4. 將主混合物轉(zhuǎn)移至管或板中并添加 DNA。

5. 根據(jù)您的儀器制造商的說(shuō)明繼續(xù)進(jìn)行放大。

筆記：

qPCR 實(shí)驗(yàn)中始終包含陽(yáng)性和陰性對(duì)照。 qPCR 擴(kuò)增的溫度程序與給定模板和引物的標(biāo)準(zhǔn) PCR 程序沒(méi)有區(qū)別。對(duì)于檢測(cè)，應(yīng)使用 FAM 通道。為了能夠區(qū)分特定產(chǎn)物和引物二聚體，請(qǐng)?jiān)?PCR 程序中使用熔解曲線(xiàn)步驟。