fivephoton蛋白提取、分離和增溶緩沖劑

蛋白提取、分離和增溶緩沖劑

60毫升,1x,PH7.4溫和的清潔劑蛋白提取緩沖液,維持抗體-抗原的相互作用,為酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定樣品分離。從大多數(shù)細(xì)胞室中提取蛋白質(zhì),包括膜、胞質(zhì)和細(xì)胞器用于酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定樣品的制備。  

• 經(jīng)過驗(yàn)證的 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定樣品制劑的配方。

• 廣泛適用的 對(duì)大多數(shù)細(xì)胞質(zhì)、跨膜和細(xì)胞外蛋白進(jìn)行了酶聯(lián)免疫吸附酶測(cè)定。

• 方便的 混合前1倍溶液。

• 相容的 有像布拉德福德這樣的蛋白質(zhì)濃度測(cè)試。

酶聯(lián)免疫吸附酶蛋白提取液中含有一種溫和的洗滌劑,可使細(xì)胞膜脫溶,大多數(shù)膜蛋白的增溶和胞質(zhì)蛋白懸浮到緩沖液中。

酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定蛋白提取緩沖                                                                     

1. 為每個(gè)10厘米的碟準(zhǔn)備500升的酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定蛋白提取緩沖液,或在一個(gè)6井的碟中為每個(gè)井準(zhǔn)備200升的酶聯(lián)免疫測(cè)定蛋白提取緩沖液。將溶液冷凍,加入蛋白酶抑制劑,包括絲氨酸蛋白酶抑制劑(如PMSF)。如有需要,也可加入一般磷酸酶抑制劑。
   

2. 用PBS去除介質(zhì)并沖洗細(xì)胞三次。

3. 在每個(gè)10厘米的碟中加入500升酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定蛋白提取緩沖液。用酶聯(lián)免疫吸附法提取蛋白緩沖液將盤內(nèi)的細(xì)胞覆蓋起來,放置在冰床上5分鐘。

4. 刮去盤子里的細(xì)胞,然后轉(zhuǎn)移到適當(dāng)?shù)墓茏永?。旋轉(zhuǎn)并點(diǎn)擊管幾次使膜溶解。你應(yīng)該觀察與基因組DNA相對(duì)應(yīng)的纖維物質(zhì),基因組DNA是細(xì)胞解體的標(biāo)志。如果纖維材料不明顯,加入20個(gè)LL酶聯(lián)免疫吸附吸附蛋白提取緩沖液,旋轉(zhuǎn)和龍頭,直到纖維材料被觀察到。把管子再冷凍15分鐘。 

5. 在4度15分鐘,收集上清劑,用于酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定。一種蛋白質(zhì)濃度測(cè)定方法,如布拉德福德法,可以用來量化總蛋白濃度。上清劑也可以長(zhǎng)期儲(chǔ)存在-80 

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